Asigurarea calităţii materialului seminal de taur
Pierderea de azot lichid în container
Din fiecare container se evaporă zilnic o cantitate precisă de azot lichid pentru a asigura temperatura de păstrare. Aşa-numita pierdere statică măsoară între 1-2 % din volumul de azot lichid dintr-un container (producătorul va da cantitatea exactă). Prin utilizarea containerului se petrece aşa-numita pierdere prin manipulare care sc estimează cu 2,5 gr. la fiecare doză preluată. În concluzie trebuie luat în considerare pentru siguranţă în fiecare zi de muncă câte 20 gr. azot lichid.
Nivelul minim de umplere în container
Determinarea nivelului minim necesar în container nu poate să fie în totalitate urmată de succes. Tehnicianul trebuie să posede, în ori caz, o tijă de control (din lemn, culoarea neagră) care prezintă marcate nivelul minim şi maxim al containerului şi care arată că paietele sunt cu totul cufundate în azot lichid. Mai departe se recomandă întocmirea unui plan de urgenţă care să ofere, în caz de necesitate (ex. la sfârşit de săptămână), unde este disponibil azot lichid.
Recomandarea noastră:
– Nivelul minim de umplere pentru un container de 1 zi = înălţimea de imersie a aperturii lojei.
– Nivelul minim de umplere pentru un container de 2 zile = 1/4 din înălţimea lojei.
– Tijă de control (din lemn, culoarea neagră) cu marcaje individuale.
– Trebuie acordată atenţie la condiţiile de păstrare a containerului (expunere limitată la soare, evitarea curenţilor de aer, ş.a.m.d.).
– Trebuie avut un plan de urgenţă personalizat (de unde pot obţine azot lichid într-o situaţie de urgenţă).
Scoaterea paietelor din container
Menţinerea dozelor congelate la nivelul gâtului în timpul scoaterii trebuie să fie cât mai scurtă cu putinţă.
Temperaturile din partea superioară a gâtului containerului sunt, în parte mai mici de -50°C (vezi Reprezentarea nr.1). În această zonă paieta fină se poate încălzi, după aproape 15 secunde, de la -196°C la -120°C şi aceasta să ducă la deteriorarea materialului seminal (vezi Reprezentarea nr.2). Cauza acesteia este faptul că structura cristalină a gheţii se schimbă în funcţie de temperatură având ca urmări şi alte modificări de volum care pot deteriora celulele spermatice.
Trebuie acordată o atenţie deosebită, depozitării în zona de vapori. Dacă paieta va fi reintrodusă direct în azot lichid atunci urmează un proces de răcire foarte rapid la -196°C (vezi curba verde din Reprezentarea nr.2). În schimb, viteza de răcire prin introducerea paietei numai în zona de vapori se diminuează clar (vezi curba roşie).
Recomandarea noastră
– Faceţi un tabel/ o listă la gâtul containerului, pentru a nu căuta inutil dozele de material seminal congelat.
– Paietele nu trebuie niciodată să rămână în zona gâtului containerului mai mult de 15 secunde.
– Poziţia de scoatere trebuie să fie la cca. 5 cm de marginea gâtului containerului.
– Niciodată nu se ridică dozele pentru a citi înscrisurile.
– Dacă este necesară mutarea dozelor dintr-un container în altul atunci trebuie garantată scufundarea lor în azot lichid. Din acest moment starea de umplere trebuie controlată, iar completarea să se facă în funcţie de condiţiile date.
Încălzirea unei paiete în zona gâtului containerului în timp a 30 secunde
TEMPERATURA CRITICĂ PENTRU SPERMA DE TAUR CONSERVATĂ CONGELAT ÎNCEPE DE LA -130°C!
Decongelarea corectă a paietelor de m.s.c.
Congelarea şi decongelarea spermei are ca urmare o pierdere a vitalităţii spermatozoizilor. Chiar şi în condiţii corecte de manipulare pierderile sunt evaluate la cca. 10% din spermatozoizii viabili. Dar chiar şi decongelarea şi temperaturile diferite suportate de m.s. până la însămânţare au o influenţă fundamentală asupra capacităţii de fecundare a spermatozoizilor.Din principiu trebuie spus că cea mai bună rată de decongelare se obţine printr-o viteză mare de decongelare într-o perioadă scurtă de timp.La decongelarea paietelor cu m.s.c. de taur trebuie avută grijă la temperatura şi timpul de decongelare. În practica însămânţării cele mai bune soluţii au fost dovedite de aparatele electronice de decongelare care pregătesc baia de apă la o temperatură de 38°C. Aceste aparate înlesnesc un proces rapid de decongelare în care celulele spermatice depăşesc foarte uşor schimbarea problematică a stării de agregare de la solid la lichid (vezi reprezentarea nr.3).
Pentru un proces de decongelare impecabil trebuie ca durata timpului să fie cât mai scurtă cu putinţă. Metodele de decongelare, exceptând baia de apă, spre exemplu decongelarea manuală necesită 15-20 secunde pentru a schimba starea de agregare. Aceasta are ca urmare o pierdere din calitatea spermei şi de aceea ea trebuie evitată în practica însămânţării.
Prin decongelarea în baie de apă la 38°C se atinge, la paieta fină (0,25 ml) după 11 secunde, o temperatură în nucleu de 20-22°C. Dacă paieta rămâne 13 secunde sau mai mult temperatura paietei trece foarte repede de valoarea de 30°C. O perioadă de decongelare mai mare de 12 secunde (pentru paieta fină) şi cu aceasta un cumul de temperaturi ridicate (30-38°C) nu reprezintă nici o acţiune directă de depreciere, dar sporeşte riscul unei deteriorări a m.s. ca urmare a unei răciri posibile în timpul transportului acesteia în aparatul de însămânţare şi apoi spre femela care trebuie însămânţată.
Curba de decongelare a unei paiete fine în baia de apă la 38°C
Decongelarea în baia de apă la 38°C:
– paieta fină 10-12 secunde
– paieta medie şi minitib-ul (65mm) 20 secunde
Mai ales când temperaturile exterioare sunt scăzute este posibilă păstrarea unei temperaturi de decongelare până la inocularea acesteia în tractul genital al femelei.
mediu înconjurător şi cum poate fi stabilizată temperatura prin mijloace relativ simple sunt reprezentate în figura nr.4.Pentru a nu pierde din calitatea spermei există o metodă favorabilă menţinerii temperaturii din paietă până la efectuare însămânţării. În exemplul prezentat în figura nr.4 (curba verde) aparatul de însămânţare este purtat asupra corpului (sub halat) într-o husă din plastic.Trebuie evitată neaparat scăderea temperaturii în doză după decongelare. În special la temperaturi alemediului foarte scăzute această preîncălzire a aparatului de i.a. înainte de instalarea pipetei se poate face prin frecare cu ajutorul unui tifon.
Recomandarea noastră
– se decongelează şi se însămânţează numai o doză odată
– aparatele de însămânţare se încălzesc înainte de introducerea paietelor
– mare atenţie mai ales în anotimpul rece: paietele decongelate nu se mai răcesc înainte de însămânţare (se transportă asupra corpului)
Igienă specială la utilizarea dozelor:
Tehnologia paietelor reprezintă un sistem relativ închis care totuşi nu este în totalitate sigur în faţa contactului cu germenii externi.
De aceea trebuie urmate indicii de bază privind igiena muncii:1. Aparatul de decongelare (baia de apă)
Apa trebuie schimbată zilnic. După decongelarea unor paiete defecte (explozia dopului, respectiv crăpături) este obligatorie schimbarea apei. La curăţarea şi dezinfectarea exterioară a aparatului de decongelare folosiţi Etanol (70%). Pentru curăţare camerei/interiorului se utilizează perii marii pentru sticle.2. Foarfece, respectiv ustensile pentru tăiat
Chiar dacă nu se taie direct între pereţii paietei, contactul foarfeci! cu sperma nu trebuie minimalizat. Zona cu problemă
(® Schneide) trebuie uscată prin frecare după fiecare tăiere şi măcar o dată pe zi să fie curăţată cu etanol (70%).
3. Aparatele de preîncălzire pentru aparatele de I.A.
Pentru că aceste aparate folosesc nu numai la preîncălzirea aparatelor de însămânţare ci şi la transportul pipetelor cu paiete este fundamentală acordarea de atenţie asupra curăţării asidue (cu perii mici pentru sticle) după murdărirea lor.
4. Cutter-ul (lama de tăiere)
Acest aparat pentru tăiere (decupare) a paietei prezintă pe lângă avantaje tehnice în comparaţie cu foarfecele (nu
se presează pereţii paietei), din păcate, şi probleme igienice din cauza murdăririi lui imediat după demontare.
5. Aparatul de însămânţare
Curăţarea exterioară a pipetei şi mandren-ului cu apă şi 70% etanol este posibilă şi nu prezintă nici o problemă.
Dar curăţarea interioară a unei pipete este posibilă numai cu soluţie de curăţare şi pompă cu jet de apă, respectiv în baie cu ultraviolete (schimbarea şi curăţarea se fac în staţiune).
6. Speculum
Pentru curăţarea sau dezinfectarea unui speculum e valabilă, atât înainte cât şi după utilizare, prin alegerea unei soluţii wofasept de 2″ %.
– Mijloacele necesare pentru curăţare şi dezinfectare ca spre exemplu: etanol (70%), soluţie wofasept (2” %) şi periile trebuie ţinute pregătite în echipamentul pentru însămânţare şi folosite în condiţiile date.
Aparat de decongelare a paietelor
Asigurarea metodelor tehnice
Însămânţarea artificială se află acum într-o continuă evoluţie, care în ultimul timp se îndreaptă spre ajutorarea tehnicienilor în rezolvarea problemelor lor.Aparatele pentru decongelare cu baie de apă sunt, ca şi înainte, cele mai bună alegeri. Primul aparat de decongelare în mediu uscat disponibil încă nu poate convinge, pentru că, înainte de toate, viteza de decongelare este prea mică. Numai aparatele electrice posedă capacitatea de a oferi o temperatura constantă de 38°C.Aparatele care conţin şi ceas sunt avantajoase şi sunt recomandate în special tehnicienilor începători. Temperatura reală de decongelare în aparat este controlata (38°C) de un termometru cu mercur (echipamentul standard), pentru că şi electronica modernă are o viaţă limitată.
Pentru administrarea aparatelor de decongelare fără ceas integrat se pot cumpăra adiţional alte dispozitive la preţuri diferite.
Trebuie întotdeauna să fie pregătit cel puţin un aparat pentru însămânţare de rezervă. În cazul în care avem la dispoziţie doar un aparat de rezervă se recomandă un aparat combinat care este potrivit atât pentru inseminarea paietelor fine cât şi a celor medii.
Pentru tăierea paietei cu material seminal folosiţi foarfece ascuţite pentru a evita pericolul de zdrobire. De asemenea fiţi atenţi la mărimea tăieturii. Husele pentru însămânţare cu formă potrivită împiedică reculul spermei între paietă şi
husă.
Dispozitiv de monitorizare a temperaturii de decongelare
Influenţarea temperaturii paietei
– Folosiţi aparate de decongelat cu timer (ceas).
– Folosiţi foarfece ascuţite.
– Folosiţi huse pentru însămânţare cu formă potrivită.
– Ca şi aparat de rezervă pentru însămânţare folosiţi un aparat combinat.
